Toksyczne sole żółciowe indukują apoptozę hepatocytów gryzoni poprzez bezpośrednią aktywację Fas

Cholestatyczne uszkodzenie wątroby wydaje się wynikać z indukcji apoptozy hepatocytów toksycznymi solami kwasów żółciowych, takimi jak glikocenodeoksycholan (GCDC). Poprzednie badania z tego laboratorium wskazują, że katepsyna B jest dalszą proteazą efektorową podczas procesu apoptotycznego hepatocytów. Ponieważ kaspazy mogą inicjować apoptozę, niniejsze badania zostały podjęte w celu określenia roli kaspaz w aktywacji katepsyny B. Immunoblotowanie komórek wątrobiaka McNtcp.24 traktowanych GCDC wykazało rozszczepienie polimerazy poli (ADP-rybozy) i laminatu B1 na fragmenty wskazujące na aktywację efektorowych kaspaz. Transfekcja CrmA, inhibitorem kaspazy 8, zapobiegła indukowanej przez GCDC aktywacji katepsyny B i apoptozie. Zgodnie z tymi wynikami zaobserwowano wzrost aktywności podobnej do kaspazy 8. w komórkach traktowanych GCDC. Badanie mechanizmu indukowanej przez GCDC aktywacji kaspazy 8 ujawniło, że dominujący negatywny FADD hamował apoptozę i że hepatocyty izolowane z myszy limfoproliferacyjnych z niedoborem Fas były oporne na apoptozę indukowaną przez GCDC. Po leczeniu GCDC, eksperymenty immunoprecypitacji wykazały Fas oligomeryzację, a konfokalna mikroskopia wykazała FADD-GFP (domena śmierci związana z Fas – zielone białko fluorescencyjne, agregacja w nieobecności wykrywalnego mRNA Fas ligand. Łącznie dane te sugerują, że apoptoza hepatocytów wywołana przez GCDC obejmuje niezależną od liganda oligomeryzację Fas, rekrutację FADD, aktywację kaspazy 8, a następnie aktywację efektorowych proteaz, w tym dalszych kaspaz i katepsyny B. Wprowadzenie Cholestaza jest cechą wielu przewlekłych chorób wątroby człowieka Chociaż przewody żółciowe otrzymują początkową zniewagę w wielu z tych zaburzeń progresja choroby wątroby ostatecznie wynika z uszkodzenia hepatocytów przez toksyczne hydrofobowe sole żółciowe (1). Wcześniejsze badania wykazały, że (a) niepowodzenie wydzielania soli żółci w cholestazie prowadzi do wysokich stężeń toksycznych soli żółciowych w obrębie hepatocyty (2, 3) i (b) te toksyczne sole kwasów żółciowych indukują wątrobokomórkowy d przez apoptozę (4, 5). Jednak mechanizm (y), za pomocą którego sole kwasów żółciowych indukują apoptozę hepatocytów, pozostaje niejasny. W ciągu ostatnich kilku lat okazało się, że proteazy odgrywają wiele ról w apoptotycznych zmianach biochemicznych i morfologicznych (6). Jeden schemat klasyfikacji rozróżnia proteazy inicjujące, wzmacniające i mechaniczne (efektorowe) (7). Niedawno wykazaliśmy, że katepsyna B ulega aktywacji i ulega translokacji do jądra podczas apoptozy wywołanej solą żółciową (8). Zahamowanie katepsyny B za pomocą wysoce selektywnych inhibitorów proteazy, ekspresja transgenu cystatyny A lub podejść antysensowych osłabia apoptozę wywołaną solą żółciową (9). Jednak wydaje się, że katepsyna B jest proteazą efektorową, opartą na niedyskryminującej aktywności endopeptydazy i późnej aktywacji w apoptozie (9). A zatem jego aktywacja prawdopodobnie zależy od inicjatora poprzedzającego lub proteaz wzmacniacza. Proteazy kaspazowe są szeroko zaangażowane w wiele modeli apoptozy (10). Co najmniej 13 (11 ludzkich i 2 myszy) ssaczych członków rodziny kaspazy zostało sklonowanych i scharakteryzowanych do tej pory (11, 12). Kaspazy 2, 3, 6, 7, 8, 9, 10 i 13 zaangażowane są w apoptozę, podczas gdy kaspazy 1, 4 i 5 prawdopodobnie uczestniczą w modulacji cytokin (13). Uważa się, że kaspazy 2, 8, 9 i 10, które mają długie prodomenki uczestniczą w kaskadach sygnałowych inicjujących apoptozę (13, 14). W szczególności okazało się, że kaspaza 8 jest znaczącą kaspazą sygnalizacyjną zaangażowaną w inicjację apoptozy przez Fas, czynnik martwicy nowotworu (TNF) typu I i receptory DR3 (15, 16). Kaspaza 8 jest również bogata w wątrobę (15, 16), co czyni tę kaspazą atrakcyjną kandydatkę do działania jako inicjująca proteaza powyżej katepsyny B w apoptozie hepatocytów za pośrednictwem soli żółciowej. Kaspaza 8 może być aktywowana przez kilka potencjalnych mechanizmów. Chociaż najszerzej badany mechanizm obejmuje aktywację prokaspazy 8 na poziomie błony komórkowej po ligacji receptorów śmierci Fas, TNFR1 i DR3 (15. 17), kaspaza 8 może być również aktywowana na poziomie retikulum endoplazmatycznego przez proces obejmujący kompleks białkowy zawierający p28 Bap31 i Bcl-2 lub Bcl-xL (18). Ponadto, Scaffidi i wsp. (19) również wykazali zwiększoną aktywację kaspazy 8 podczas apoptozy po dysfunkcji mitochondriów w określonych typach komórek. Ogólnym celem niniejszego badania było zbadanie roli kaspaz w apoptozie indukowanej solą żółciową i zbadanie możliwości mechanistycznego związku między katepsyną B a kaspazami, w szczególności kaspazą 8
[przypisy: szlifowanie stali nierdzewnej, ile kalorii ma mozzarella, body space tychy ]
[przypisy: stosowanie tabletek antykoncepcyjnych, solarium tychy, bodyspace efekty ]