Tłumaczenie represji HIF2 ekspresja u myszy z Chuvash polycythemia odwraca czerwienicę cd

Splenomegalia myszy VhlR200W została uratowana przez dietetyczną suplementację Tempol, a kolor śledziony stał się lżejszy, co sugeruje, że suplementacja Tempol poprawiała erytropoezę pozasłupkową. (C i D) Poziomy hematokrytu, jak określono przez wirowanie z rurką kapilarną, i (E) poziom hemoglobiny i (F) RBC 5- do 8-miesięcznych myszy WT i VhlR200W karmionych kontrolą lub dietą uzupełnioną Tempol wykazały, że z dieta kontrolna, parametry te były podwyższone u myszy VhlR200W, a suplementacja Tempol znacząco zmniejszała poziomy hematokrytu, hemoglobiny i RBC u zmutowanych myszy. (D = F) *** P <0,001, zwykłą 1-drogową ANOVA (wielokrotne porównania). Mierzono poziomy hematokrytu myszy WT i VhlR200W utrzymywanych na diecie kontrolnej lub na tej samej diecie uzupełnionej Tempolem i obserwowano znaczący wzrost poziomów hematokrytu myszy VhlR200W z dietą kontrolną, w porównaniu z poziomami myszy WT na diecie kontrolnej. (Figura 2, C i D, i dodatkowa Figura 2A), potwierdzając, że te myszy miały erytrocytozę / czerwienicę. Ponadto poziomy hemoglobiny i liczby krwinek czerwonych również znacząco wzrosły u myszy VhlR200W karmionych dietą kontrolną (fig. 2, E i F), jak zaobserwowano wcześniej (14). Co ważne, w przypadku leczenia Tempol poziom hematokrytu, hemoglobiny i RBC myszy VhlR200W znacznie się zmniejszył (Figura 2, C = F), zgodnie z naszym wnioskiem, że erytropoezę zmniejszono u myszy z mutantami z uzupełnianiem Tempol. Nie obserwowaliśmy żadnego znaczącego wpływu mutacji lub diety na wskaźniki RBC, retikulocyty, liczbę białych krwinek, liczbę płytek krwi lub poziomy glukozy w surowicy u myszy VhlR200W (dodatkowa Figura 2, B. H). Mierzyliśmy poziomy ferrytyny w surowicy w diecie kontrolnej. i myszy karmionych WPC i Tempol w diecie WTC i VhlR200W stosując metodę ELISA i zaobserwowano, że poziomy ferrytyny w surowicy były nieznacznie, ale znacząco wyższe u myszy VhlR200W karmionych dietą kontrolną w porównaniu z poziomami u myszy WT (Suplementowa Figura 2I), być może z powodu przeciążenia żelazem makrofagowym w wyniku zwiększonej erytrofagocytozy, ponieważ makrofagi są głównym źródłem ferrytyny w surowicy (31). Zmniejszona erytropoeza u myszy Vhl-R200W traktowanych Tempol wynika z obniżenia produkcji EPO spowodowanej represyjną replikacją Hif2 .. Wcześniejsze badanie wykazało, że pacjenci z czerwienicą Chuvash mieli znacząco wyższe stężenia erytropoetyny w surowicy (3). W poprzedniej pracy z myszami VhlR200W (14), naukowcy zaobserwowali zwiększoną EPO w surowicy, ale różnica w stosunku do myszy WT nie była statystycznie istotna. Zmierzyliśmy poziomy EPO w surowicy metodą ELISA i zaobserwowaliśmy mały, ale znaczący wzrost EPO w surowicach tych zmutowanych myszy (Figura 3A), analogicznie do tego, co obserwowano u pacjentów Chuvash. Podwyższone poziomy EPO w surowicy były znacznie zmniejszone, gdy zmutowane myszy były leczone Tempolem, co wskazuje, że Tempol korygował erytrocytozę / czerwienicę u myszy VhlR200W poprzez obniżenie poziomu EPO. Figura 3Dcmniejsza erytropoeza u myszy VhlR200W traktowanych Tempol była wynikiem obniżenia poziomu EPO spowodowanego represyjną translacją HIF2a, co było konsekwencją zwiększonego HIF2. Aktywność wiązania Ip. Irp1. (A) Poziom EPO w surowicy mierzony za pomocą testu ELISA był znacznie zwiększony u myszy VhlR200W karmionych dietą kontrolną, a traktowanie Tempol zmniejszało poziomy EPO u tych zmutowanych myszy. (B) Analizy immunoblotowe frakcji jądrowych z lizatów nerkowych wykazały zwiększone HIF2. poziomy białka w myszach VhlR200W karmionych dietą kontrolną i HIF2. poziom białka zmniejszył się, gdy zmutowane myszy karmiono dietą z uzupełnieniem Tempol. (C) Kwantyfikacja tych HIF2. poziomy białka. (D) Testy przesunięcia ruchliwości RNA dla ferrytyny IRE i HIF2. IRE wiązania lizatów nerkowych pod nieobecność lub obecność. merkaptoetanol (ME) (który przekształca Irp1 z akonitazy cytozolowej w formę wiążącą IRE) wykazał, że większość aktywności wiązania IRE została wniesiona przez Irp1, a traktowanie Tempol znacząco zwiększyło wiązanie IRE Irp1 u myszy VhlR200W. Kwantyfikacje aktywności wiązania Irp1 dla (E) ferrytyny IRE i (F) HIF2. GNIEW. (G) Analiza Western blot lizatów nerkowych ujawniła, że poziomy białka Irp1 pozostały niezmienione w myszach VhlR200W karmionych Tempolem. Dane w A, C, E i F oznaczają średnią. SD. * P. 0.05, ** P. 0,01 i *** P <0,001, przez niesparowany, dwustronny test t. Ponieważ EPO jest znanym specyficznym celem transkrypcyjnym Hif2. (32, 33), oceniliśmy Hif2. poziomy białka we frakcjach jądrowych z lizatów nerkowych myszy WT na diecie kontrolnej i myszy VhlR200W utrzymywanych na diecie kontrolnej lub diecie z uzupełnieniem Tempol, po zebraniu nienaruszonych nerek w komorze azotowej i lizie tkanek w komorze beztlenowej [patrz też: ile kalorii ma mozzarella, lekarz medycyny pracy nysa, apteczka pierwszej pomocy nie powinna zawierać ] [hasła pokrewne: space tychy, medycyna pracy nysa, kalkulator kalorii na mase ]