Limfocyty T regulatorowe CD4 + CD25 + hamują odrzucanie alloprzeszczepu, w którym pośredniczą limfocyty T pamięci CD8 + za pośrednictwem mechanizmu zależnego od CD30 ad 6

Komórki CD4 + CD25 + były ledwo wykrywalne w przeszczepach pobranych od myszy, które otrzymały tylko komórki pamięci CD8 + z pamięcią, co wskazuje, że wewnątrzszczepowa populacja CD4 + CD25 + jest w dużej mierze pochodną przeniesionej populacji Treg. Figura 4 komórki Treg promują apoptozę komórek T pamięci CD8 +, ale nie hamują ich proliferacji in vivo. (a) Analiza proliferacji komórek T pamięci in vivo za pomocą znakowania BrdU. Splenektomiczne myszy alfa, przeszczepione alloprzeszczepem serca, otrzymywały komórki T pamięci 1B2 + CD8 + i / lub komórki Treg i pulsowano dootrzewnowo BrdU 6 dni po transferze komórki. Dwadzieścia cztery godziny później komórki infiltrujące przeszczep barwiono na 1B2, CD8 i BrdU. Procent komórek BrdU + jest pokazany na histogramach po bramkowaniu na komórkach 1B2 + CD8 +. Linie przerywane reprezentują kontrolę izotypową. Pokazano jedno z trzech eksperymentów. (b) Analiza apoptozy komórek T pamięci in vivo za pomocą metody TUNEL. Komórki naciekające przeszczep z myszy podobnych do opisanych powyżej wybarwiono na 1B2, CD8 i TUNEL. Procent komórek TUNEL + jest pokazany na histogramach po bramkowaniu komórek 1B2 + CD8 +. Linie przerywane reprezentują kontrolę ujemną. Pokazano jedno z trzech eksperymentów. (c) Absolutną liczbę pamięci komórek T 1B2 + CD8 + na graft obliczono zgodnie z cytometrią przepływową. Pokazano jedno z trzech eksperymentów. * P <0,05 w stosunku do grupy M + WT Treg. Komórki Treg promują apoptozę komórek pamięci CD8 + w pamięci in vitro w sposób zależny od kontaktu. Przedstawione powyżej dane in vivo sugerują, że komórki Treg indukują apoptozę komórek T pamięci CD8 +. Aby dodatkowo potwierdzić to odkrycie in vitro, umieściliśmy pamięć komórek T CD8 + w hodowli z komórkami Treg i oceniliśmy apoptozę populacji CD8 + CD44high 48 godzin później. Jak pokazano na Figurze 5c, indukowane DST komórki TreT WT zwiększały apoptozę komórek T pamięci CD8 + około 2,5-krotnie, podczas gdy naiwny WT Treg i indukowane DST CD30a /. Komórki Treg tego nie zrobiły. Ta indukcja apoptozy była swoista dla antygenu, ponieważ komórki Treg indukowane przez aloantygen będący trzecią częścią (TPT Treg, Figura 5c) nie promowały apoptozy komórek CD8 pamięci. Blokowanie interakcji Fas / FasL przez anty-FasL Ab nie zapobiegło zabijaniu komórek pamięci przez komórki DST Treg, co sugeruje, że komórki Treg promują śmierć komórek T pamięci CD8 + w sposób niezależny od Fas. Kontrola izotypowa Ab dla anty-FasL nie wpłynęła na apoptozę komórki pamięci (dane nie pokazane). Apoptoza komórek T pamięci nie zwiększyła się, gdy były one hodowane wspólnie z komórkami Treg w Transwell, które fizycznie oddzielały Treg i komórki pamięci, ale pozwalały im na dzielenie się tymi samymi mediami. Z drugiej strony, komórki Treg nie zdołały znacząco zahamować wewnątrzkomórkowej ekspresji IFN-y w komórkach pamięci (Figura 5a) i nie tłumiły ich proliferacji (Figura 5b). Podsumowując, dane te dostarczają dowodów, że indukowane antygenem komórki Treg tłumią przywoływanie komórek T pamięci CD8 + przez indukcję ich apoptozy, ale nie hamują proliferacji. Ta proapoptotyczna funkcja zależy od obecności CD30 na komórkach Treg i na bezpośrednim kontakcie komórka-komórka, ale niezależna od interakcji Fas / FasL. Figura 5 komórki Treg promują apoptozę komórek T pamięci CD8 + in vitro w sposób zależny od kontaktu. (a) Oczyszczone komórki limfocytów T CD8 + (CD8 + CD44high) hodowano z komórkami Treg w stosunku 1: 2 (Treg / M) w 24-studzienkowych płytkach w obecności napromieniowanych komórek śledziony BALB / c (APC) przez 48 godziny. Wewnątrzkomórkowa ekspresja IFN-y jest pokazany na histogramach po bramkowaniu komórek CD8 + CD44high. Zacieniowany histogram pokazuje kontrolę izotypową, a linie przerywane, szare i czarne przedstawiają same komórki pamięci (M), M plus naiwne komórki Treg i M plus komórki DST Treg. (b) Komórki T pamięci CD8 + inkubowano w sposób opisany powyżej. Ich proliferację mierzono wychwytami [3H] -TdR. Wyniki przedstawiono jako średnią z potrójnych hodowli. (c) Komórki limfocytów pamięci CD8 + hodowano z komórkami Treg (1: 2, Treg / pamięć) w 24-studzienkowych płytkach i transfarze w obecności APC i wskazanych środków (5 ug / ml anty-FasL) przez 48 godzin. . Komórki następnie wybarwiono markerami powierzchniowymi, utrwalono, permeabilizowano i zmierzono do apoptozy metodą TUNEL. Przedstawiono jedno z trzech eksperymentów; dane wyrażono jako procent apoptotycznych komórek CD8 + CD44high. Dyskusja Pokazaliśmy tutaj, że indukowane antygenem, ale nie naiwne komórki Treg CD4 + CD25 + tłumią odrzucenie alloprzeszczepu za pośrednictwem limfocytów T pamięci CD8 + [patrz też: justfit, kapsuła tychy, space tychy ] [podobne: lekarz medycyny pracy nysa, ile kalorii ma mozzarella, infekcja dróg moczowych objawy ]