Funkcjonalny receptor androgenowy nie jest wystarczający, aby umożliwić estradiolowi ochronę kości po gonadektomii u myszy z niedoborem receptora estradiolu cd

Wartości usieciowania deoksypirydynoliny zostały podzielone przez stężenie kreatyniny, aby skorygować wydalanie wody. Stężenie estradiolu i testosteronu w surowicy mierzono za pomocą ludzkich zestawów RIA (nr kat. 2464-07 i 2463-07) przystosowanych do myszy (Immunotech, Marsylia, Francja). Kwantyfikacja poziomów receptorów hormonów płciowych. Femory 12-tygodniowych myszy sproszkowano w ciekłym azocie i całkowite RNA ekstrahowano przy użyciu zestawu TOTALLY RNA (Ambion Inc., Austin, Texas, USA). RNA określono ilościowo spektrofotometrycznie, a integralność preparatów RNA zbadano za pomocą elektroforezy w żelu agarozowym. cDNA zsyntetyzowano przy użyciu zestawu Advantage RT-for-PCR (CLONTECH Laboratories Inc., Palo Alto, California, USA). Specyficzne mRNA dla ERa, ERa, AR i PR mierzono za pomocą ilościowej RT-PCR w czasie rzeczywistym, stosując system ABI PRISM 7700 Sequence Detector (Perkin-Elmer Applied Biosystems, Foster City, Kalifornia, USA). Wstępnie opracowany test TaqMan zastosowano do ilościowego oznaczenia GAPDH. Ponadto zaprojektowano następujące startery i sondy dla różnych receptorów przy użyciu oprogramowania Primer Express (Perkin-Elmer Applied Biosystems): ER. przedni grunt, TGC TGG TTC AAG AGC GTC TTT; ER. primer odwrotny, GCG CCA CTC GAT CAT TCG; ER. sonda, CTT CCG TCT TAC TGT CTC AGC CCT TGA CTT CT; ER. przedni starter, CGT AAT GAT ACC CAG ATG CAT AAT CA; ER. primer odwrotny, CAG CCC TGT TAC TAG TCC AAG CA; ER. sonda, AAG AGG GAT GCT CAC TTC TGT GCC GCT; Start przedni AR, CCA GCT CCT CCA GAT CAG GAT; Primer rewersyjny AR, TGC CGG CCT CGT TCA A; Sonda AR, CAG CTG CTC CGC CGA CAT TAA; aromatyzujący starter przedni, TTT TTT CTT CTG AGG CCA AAT AGC; aromazowy primer odwrotny, CGG GAC CAT GAT GGT GAC; Sonda aromatazy, TCT TGG AAA TGC TGA ACC CCA TGC A. Cykl progowy, który koreluje odwrotnie z docelowymi poziomami mRNA, został zmierzony jako numer cyklu, przy którym emisja fluorescencyjna reportera wzrasta powyżej poziomu progowego. Dane ekspresji wszystkich próbek znormalizowano do poziomów GAPDH. Wyniki Efekty gonadektomii. Po gonadektomii zaobserwowano znaczną utratę kości gąbczastej u wszystkich mężczyzn z nokautem i u kobiet ER /. i ER /. myszy (Figura 1, aib) i był związany z podwyższonym obrotem kostnym (patrz Figury 2c, 3c, 5b, 6c). W ER . /. kobiety, już niski poziom BV / TV nie był jeszcze bardziej zmniejszony (ryc. 1b), ani nie było żadnych zmian w powierzchni osteoblastu lub osteoklastach jako odsetek powierzchni kości beleczkowej (ObS / BS, OcS / BS) po wycięciu jajników (średnia ObS / BS . SEM: operacja pozorowana, 19,9%. 5,0%, wycięcie jajników, 23,9%. 5,5%, średnia wartość. SS / BS. SEM: operacja pozorowana, 14,1%. 2,7%, wycięte jajniki, 14,1%. 1,5%). Figura Odpowiedź myszy z nokautem WT i ER na gonadektomię. Myszy poddawano operacji pozorowanej (czarne słupki) lub gonadektomii (białe słupki) w 12. tygodniu życia, a kości zbierano po 8 tygodniach. (a) Tb.BMD i BV / TV u myszy płci męskiej wszystkich genotypów były znacząco zmniejszone po orchidektomii. (b) Tb.BMD i BV / TV były znacznie zmniejszone po wycięciu jajników u samic myszy wszystkich genotypów, z wyjątkiem ER . / .. Wartości są średnie. SEM. * P <0,05, ** P <0,01, *** P <0,001 vs. operacja pozorna tego samego genotypu. Ryc. 2Male ER /. myszy nie reagują na leczenie estradiolem (E2). (a) Reprezentatywne fragmenty proksymalnej piszczelowej od WT i ER. / reprezentowane przez von Kossa. mężczyźni pozorowani operacyjnie, poddani orchidektomii (Orx) lub poddani orchidektomii i leczeni peletkami o powolnym uwalnianiu, dostarczającymi 50 ug / kg / dzień estradiolu (Orx + E2). (b) BV / TV i Tb.BMD były zwiększone po leczeniu estradiolem u myszy WT, ale leczenie estradiolem nie zmieniło BV / TV lub Tb.BMD w ER /. mężczyźni. (c) ObS / BS, szybkość tworzenia kości wyrażona jako procent powierzchni kości beleczkowej (BFR / BS) i OcS / BS była podwyższona po orchidektomii w WT i ER /. mężczyźni. Zapobiega temu terapia estradiolem w WT, ale nie w ER /. mężczyźni. Zwiększeniu ObS / BS i OcS / BS zapobiegało leczenie estradiolem u samców WT, ale nie w ER /. mężczyźni. BFR / BS był dalej podwyższony u samców WT leczonych estradiolem, ale pozostał niezmieniony w leczonym ER. /. mężczyźni. Wartości są średnie. SEM. * P <0,05, ** P <0,01, *** P <0,001 vs. operacja pozorowana tego samego genotypu; ++ P <0,01, +++ P <0,001 vs. Orx tego samego genotypu. Figura 3Testosteron zapobiega utracie masy wywołanej orchidektomią w WT i ER. /. mężczyźni. Leczenie antyandrogenowe częściowo odtwarzało efekty orchidektomii. (a) Reprezentatywne fragmenty proksymalnej piszczelowej od WT (po lewej) i ER. / reprezentowane przez von Kossa. (po prawej) mężczyźni operowani pozornie (Sham), poddani orchidektomii (Orx), poddani orchidektomii i leczeni podskórnym propiotestosteronem 10 mg / kg / d (Orx + T) lub operacyjnie operowani i leczeni podskórnie antyandrogenem RU58642 (30 mg / kg / d) (Sham + aA) [hasła pokrewne: kalkulator zapotrzebowania kalorycznego na mase, just fit, lekarz medycyny pracy nysa ] [patrz też: medycyna pracy nysa, kalkulator kalorii na mase, kalkulator zapotrzebowania kalorycznego na mase ]