Funkcjonalny receptor androgenowy nie jest wystarczający, aby umożliwić estradiolowi ochronę kości po gonadektomii u myszy z niedoborem receptora estradiolu ad

Wygrane myszy zostały wygenerowane i genotypowane za pomocą PCR, jak opisano wcześniej (18). Krótko, ER /. myszy wytworzono przez rekombinację homologiczną, stosując trzy miejsca loxP flankujące ekson 3 (zawierający pierwszy palec cynkowy domeny wiążącej DNA) i kasetę TKneo w celu wytworzenia w pełni rozerwanego ER. mutant. ER /. myszy wytworzono przez wstawienie genu neo do eksonu 3 (zawierającego również pierwszy palec cynkowy domeny wiążącej DNA). Nie wykryto na przemian transkryptów mRNA w ER. /. myszy, i chociaż niektóre zostały wykryte w ER. /. myszy, nie kodowano żadnych funkcjonalnych domen wiążących DNA lub ligand. Opieka nad zwierzętami była zgodna z wytycznymi instytucjonalnymi. ER /. myszy były w krzyżówce wstecznej 6 w czasie eksperymentu i ER /. myszy były w krzyżówce wsteczny 4, obie na tle C57 / B6. Ze względu na trudności hodowlane w ER . /. myszy, nie były krzyżowane wstecznie, ale miały 50% tła C57 / B6. Kontrole z miotu były wykorzystywane do wszystkich analiz. Gonadectomy i manipulacje hormonalne. Aby określić wpływ gonadektomii, 12-tygodniowe myszy były operowane pozornie, wyciętymi jajnikami lub poddanymi orchidektomii, a tkanki zbierano 4 lub 8 tygodni po operacji do analizy histomorfometrycznej i densytometrycznej. W przypadku wszystkich zabiegów hormonalnych rozpoczęto leczenie w czasie operacji i kontynuowano do momentu pobrania tkanki. Ponieważ nasze poprzednie dane (13) potwierdzają, że ER. nie reguluje BV / TV u samców myszy, ograniczyliśmy manipulacje hormonalne samców myszy do WT i ER /. tylko. Estradiol rozcieńczono w etanolu / oleju kukurydzianym (90:10) w celu spowolnienia uwalniania hormonu i podawano przez codzienną iniekcję podskórną w WT, ER4 / y i ER4 /. kobiety. Podskórne iniekcje dały następujące poziomy estradiolu w krążeniu w ER /. samice: 24 .g / ml u myszy operowanych pozornie; pg / ml u myszy z wyciętymi jajnikami; i 5, 20, 650 i 1850 pg / ml u myszy traktowanych odpowiednio 1, 10, 100 i 1000 .g / kg / dzień estradiolu. Dostarczenie 1, 10, 100 i 1000 g / kg / dzień estradiolu do ER /. samice myszy za pomocą wszczepionych mikropomp założyły średni poziom krążącego estradiolu odpowiednio: 25, 80, 570 i 1480 pg / ml. W ER /. mężczyźni i ER . /. kobiety, w których staraliśmy się osiągnąć najwyższe możliwe ekspozycje na hormon, estradiol był podawany przez peletki o powolnym uwalnianiu (Innovative Research of America, Sarasota, Floryda, USA). Pellet wszczepiony podskórnie dawał, na przykład, średni poziom estradiolu we krwi 7 .g / ml u zwierząt leczonych placebo, 94 .g / ml u zwierząt leczonych 30 .g / kg / dzień i 245 .g / ml u zwierząt leczonych . g / kg / d. U mężczyzn, propionian testosteronu w dawce 10 mg / kg / dobę podawano przez codzienną iniekcję podskórną, a u kobiet, mniejszą dawkę 2,5 mg / kg / dobę podawano przez peletkę o powolnym uwalnianiu (Innovative Research of America). Antiestrogen RU58668 (19) i antyandrogeny RU58642 i RU50818 (20, 21) podawano odpowiednio w dawce 10 mg / kg / dzień i 30 mg / kg / dzień, codziennie, w iniekcji podskórnej. Peryferyjna ilościowa tomografia komputerowa. Przeprowadzono densytometrię za pomocą obwodowej ilościowej tomografii komputerowej Stratec (pQCT) XCT Research SA + (wersja oprogramowania 5,4B, Norland Medical Systems Inc., White Plains, New York, USA) działającej w rozdzielczości 70 .m. Wykonano metafazowe skany pQCT z rozciętymi prawymi piszczelami w celu pomiaru Tb.BMD. Skan znajdował się w metafizie w odległości od dalszej płytki wzrostowej odpowiadającej 6% całkowitej długości piszczeli (obszar zawierający kość korową i beleczkową). Zdefiniowaliśmy beleczkowaty region kości, ustawiając obszar wewnętrzny na 60% całkowitej powierzchni przekroju, jak opisano wcześniej (13). Współczynniki zmienności między testami dla pomiarów pQCT były mniejsze niż 2,5% (13). Histomorfometria. Tibiae zebrano po 4 lub 8 tygodniach od operacji, tj. W wieku 16 lub 20 tygodni, utrwalono w 3,7% formaldehydzie w PBS i osadzono w metakrylanie metylu (22). Podwójne znakowanie fluorochromem przeprowadzono jak opisano wcześniej (22). Pięć mikrometrowych odcinków bliższej metafizy zabarwiono błękitem toluidyny lub analizowano nie wybarwiony dla znaczników fluorochromowych. Histomorfometrię przeprowadzono zgodnie ze standardowymi procedurami w bliższej kości piszczelowej przy użyciu systemu OsteoMeasure (OsteoMetrics Inc., Decatur, Georgia, USA). Grubość kory biodrowej i okostne mineralne współczynniki okostno-kości zostały zmierzone zgodnie z wcześniejszym opisem (22). Biochemia surowicy i moczu. Sercowskie wiązania krzyżowe osteokalcyny i dezoksypirydynoliny oceniano za pomocą zestawów z Biomedical Technologies Inc. (Stoughton, Massachusetts, USA) i Pacific Biometrics Inc.
[patrz też: ile kalorii ma mozzarella, odkwaszanie organizmu przepisy, zapotrzebowanie na białko ]
[więcej w: kapsuła tychy, body space tychy, space tychy ]