Tłumaczenie represji HIF2 ekspresja u myszy z Chuvash polycythemia odwraca czerwienicę czesc 4

Znaleźliśmy Hif2. poziomy białka były zwiększone w lizatach myszy nerki VhlR200W, ale znacznie zmniejszone, gdy zmutowane myszy karmiono dietą z uzupełnieniem Tempol (Figura 3, B i C). Zmierzyliśmy poziomy mRNA innych celów HIF. Chociaż Hickey i in. (14) stwierdzili niewielką, ale znacznie wyższą ekspresję genu Glut1 w lizatach VhlR200W nerki, poziomy mRNA Glut pozostały niezmienione w nerkach naszych myszy VhlR200W, ani terapia Tempol nie zmieniała ekspresji Glut1 (Suplementowa Figura 3A). Poziomy ekspresji VEGF w płucach nie zmieniły się u myszy VhlR200W (Suplementowa Figura 3B), jak miało to miejsce w przypadku początkowych obserwacji (34). Obniżenie poziomu Hif2. w myszach VhlR200W karmionych Tempol wynika ze zwiększonego Hif2. Aktywność wiązania Ip. Irp1. Hif2. ma IRE w swoim 5 -UTR, z którym Irps może wiązać. Aby ustalić, czy Tempol zwiększył Hif2. Aktywność wiązania IRE8 Irp1 u tych myszy VhlR200W, jak wcześniej obserwowano w mysich embrionalnych komórkach fibroblastów, jak również w lizatach mózgu z Irp2a / l. zwierzęta (29), przeprowadziliśmy test zmiany ruchliwości RNA z lizatami nerkowymi myszy WT i VhlR200W, stosując radioznakowaną ferrytynę IRE i Hif2. Sondy IRE. Irp1 wiąże się zarówno z ferrytyną IRE i Hif2. Sondy IRE znacznie zwiększyły się w myszach z dodatkiem Tempol (Figura 3, D. F), chociaż poziomy białka Irp1 pozostały niezmienione (Figura 3G), wskazując, że zwiększone wiązanie Irp1 z HIF2. IRE w 5 -UTR u myszy VhlR200W traktowanych Tempol w znacznym stopniu przyczyniły się do translacyjnej represji HIF2 .. Aby potwierdzić, że Tempol polepszył erytrocytozę / czerwienicę u myszy VhlR200W poprzez aktywację wiązania Irp1 z Hif2. IRE, karmimy Irp1. /. myszy z kontrolą lub dietą z uzupełnieniem Tempol, a następnie oceniano pełną morfologię krwi (CBC) u tych myszy. Poziom hematokrytu Irp1. /. zwierzęta wzrosły o więcej niż 10% w porównaniu z myszami WT na diecie kontrolnej, jak wcześniej zaobserwowano (18), ale te podwyższone poziomy hematokrytu nie zmniejszyły się, gdy Irp1 (3 /. myszy karmiono dietą uzupełnioną Tempolem (Figura 4A), co pokazuje, że Tempol nie doprowadził do supresji poziomów hematokrytu przy braku Irp1. Ponadto skrzyżowaliśmy myszy heterozygotyczne VhlR200W (VhlR / +) z Irp1. /. zwierzęta i wyhodował VhlR / + Irp + /. myszy do generowania VhlR200W Irp1. /. myszy. Utrzymaliśmy te myszy na diecie kontrolnej lub suplementowanej Tempolem po odsadzeniu. Co uderzające, poziomy hematokrytu wzrosły do tak wysokiego jak 84% w tych VhlR200W Irp1. /. myszy, co wskazuje na upośledzoną degradację Hif2. powodowane przez homozygotyczne mutacje R200W w genie Vhl, połączone z translacyjną derepresją Hif2. powodowane przez ukierunkowaną delecję Irp1, prowadziło do znacznego zwiększenia erytropoezy u tych myszy. Te znacznie podwyższone wartości hematokrytu nie zmniejszyły się istotnie po traktowaniu Tempolem (Figura 4A), dodatkowo potwierdzając, że Tempol osłabia erytrocytozę / czerwienicę poprzez aktywację Irp1 i demonstruje, że delecja Irp1 u myszy blokuje korzystne działanie Tempol. Poziomy RBC i hemoglobiny były również bardzo wysokie w VhlR200W Irp1. /. myszy i te parametry krwi również nie uległy znacznemu zmniejszeniu w przypadku leczenia Tempolem (Figura 4, B i C). Ponadto Tempol nie zmienił istotnie wskaźników RBC lub retikulocytów, WBC lub liczby płytek krwi Irp1. /. lub VhlR200W Irp1. /. myszy. (Dodatkowa Figura 4, A. F). Poziomy EPO kontrolnej diety. Karmione VhlR200W Irp1. /. myszy były 3,3-krotnie wyższe niż myszy WT utrzymywane na diecie kontrolnej (Figura 4D), podczas gdy wykryliśmy znaczący 1,5-krotny wzrost poziomów EPO w VhlR200Wmice, co wskazywało, że Irp1 jest fizjologicznym regulatorem Hif2. i poziomy ekspresji erytropoetyny. Figura 4Genetyczna ablacja Irp1 znacznie zwiększyła myszy z czerwienicą myszyVVVR200W, które stały się oporne na Tempol, potwierdzając, że Tempol aktywuje Irp1 w celu złagodzenia czerwienicy u myszy VhlR200W, a Tempol także częściowo chroni myszy WT przed niedotlenionym czerwienicą / erytrocytozą. (A) Hematokryt (oznaczony przez wirowanie w kapilarach), (B) hemoglobina i (C) poziomy RBC 5- do 8-miesięcznego WT, Irp1a / a, i VhlR200W Irp1. /. myszy karmione kontrolą lub dietą uzupełnioną Tempol ujawniły, że Tempol nie zmniejszał erytropoezy, gdy Irp1 był ablowany u myszy. (D) Poziomy EPO w diecie kontrolowanej karmione VhlR200W Irp1. /. myszy były 3,3-krotnie wyższe niż myszy WT (dane dla myszy WT są takie same jak na Figurze 3A). (E) Hematocrit, (F) hemoglobina i (G) poziomy RBC 10-miesięcznych myszy na diecie kontrolnej lub diecie Tempol po umieszczeniu ich w warunkach normoksycznych lub niedotlenienia (10% tlenu) wykazały, że parametry krwi znacznie wzrosły w myszy karmionych hipoksyczną dietą kontrolną i że suplementacja Tempol częściowo zapobiega erytrocytozie / czerwienicy u tych myszy
[podobne: ośrodki terapii uzależnień, żel pod prysznic bez sls, infekcja dróg moczowych objawy ]
[więcej w: kalkulator zapotrzebowania kalorycznego na mase, odkwaszanie organizmu przepisy, apteczka pierwszej pomocy nie powinna zawierać ]