Kwas dimetyloguanidyno-walerianowy jest markerem tłuszczu wątrobowego i przewiduje cukrzycę ad 7

Analizy MS przeprowadzono za pomocą jonizacji przez elektrorozpylanie w trybie jonów dodatnich przy użyciu analizy pełnego skanowania od 70 do 800 m / z przy rozdzielczości 70 000 i szybkości akwizycji danych 3-Hz. Inne ustawienia MS to: gaz osłonowy 40, gaz zamiatania 2, napięcie rozpylania 3,5 kV, temperatura kapilary 350 ° C, soczewka S RF 40, temperatura grzałki 300 ° C, mikroskopy 1, cel automatycznej kontroli wzmocnienia × 106 i maksymalny jon czas 250 ms. Identyfikacja metaboliczna została potwierdzona przy użyciu autentycznych standardów referencyjnych. Surowe dane przetwarzano przy użyciu oprogramowania TraceFinder (Thermo Fisher Scientific) i Progenesis QI (Nonlinear Dynamics). Widma masowe jonów produktu (MS / MS) zebrano przy użyciu hybrydowego spektrometru kwarcowego Q Exactive Focus Hybrid Quadrupole (Thermo Fisher Scientific). Read more „Kwas dimetyloguanidyno-walerianowy jest markerem tłuszczu wątrobowego i przewiduje cukrzycę ad 7”

Kwas dimetyloguanidyno-walerianowy jest markerem tłuszczu wątrobowego i przewiduje cukrzycę ad 6

Koordynacja przypadków NASH w szpitalu obejmowała pacjentów i kontrole w Massachusetts General Hospital. Pacjenci poddawani klinicznie wskazanej kuracji odchudzającej wykonywali biopsję wątroby standardowej w czasie operacji. Pacjenci z innymi przewlekłymi chorobami wątroby lub spożywania alkoholu byli wykluczeni. Każda biopsja została oceniona przez zaślepionego, kontrolowanego tablicą hepatopatologa według kryteriów ustalonych przez Kleiner et al. (40). Read more „Kwas dimetyloguanidyno-walerianowy jest markerem tłuszczu wątrobowego i przewiduje cukrzycę ad 6”

Kwas dimetyloguanidyno-walerianowy jest markerem tłuszczu wątrobowego i przewiduje cukrzycę ad 5

Wstępne badania eksperymentalne w naszym laboratorium wykazały zwiększoną ekspresję AGXT2 w wątrobach myszy karmionych dietą wysokotłuszczową (HFD), z proporcjonalnym wzrostem poziomów DMGV w krążeniu (Suplementalna Figura 5). Nasz model pracy polega na tym, że podczas rozwoju NAFLD obniżona aktywność enzymatyczna DDAH1 (34. 36) i obniżone poziomy BAIBA w chorobie kardiometabolicznej (32) prowadzą do zwiększenia stężenia ADMA, które wiąże AGXT2 bardziej swobodnie (z powodu zmniejszonego poziomu BAIBA, główny substrat AGXT2), a tym samym prowadzi do zwiększonej konwersji do DMGV przez AGXT2 (patrz Suplementowa Figura 6). Ponadto nasze badania ekspresji AGXT2 na mysią wątrobę sugerują, że w NALFD ekspresja AGXT2 jest zwiększona i że, co sugeruje, występuje większa aktywność enzymatyczna powodująca konwersję ADMA do DMGV. Przyszłe badania muszą określać, czy sam DMGV nadaje efekty funkcjonalne w systemach modelowych. Read more „Kwas dimetyloguanidyno-walerianowy jest markerem tłuszczu wątrobowego i przewiduje cukrzycę ad 5”

Kwas dimetyloguanidyno-walerianowy jest markerem tłuszczu wątrobowego i przewiduje cukrzycę czesc 4

Oceniliśmy, czy poziomy DMGV są śledzone z utratą masy ciała po operacji obejścia, co udowodniono, że poprawia NAFLD (31). Przeprowadziliśmy profilowanie metabolomiczne na naszej docelowej platformie, wykorzystując próbki osocza pochodzące z klinicznej kohorty 39 pacjentów z bypassem żołądkowo-jelitowym typu Y (RYGB). Wszyscy pacjenci mieli NAFLD zdefiniowany przez biopsję w czasie operacji i pobrano próbki krwi w tym czasie. Pacjenci powrócili do kliniki 2 i 6 miesięcy po operacji, mierzono parametry kliniczne i pobrano osocze do biochemii klinicznej (Tabela 6). W ciągu 2 i 6 miesięcy po RYGB pacjenci mieli znaczną utratę wagi, a także znaczną poprawę parametrów metabolicznych, takich jak poziom glukozy, skurczowe ciśnienie krwi (SBP), rozkurczowe ciśnienie krwi (DBP), cholesterol całkowity, cholesterol LDL i triglicerydy. Read more „Kwas dimetyloguanidyno-walerianowy jest markerem tłuszczu wątrobowego i przewiduje cukrzycę czesc 4”

Badanie długich niekodujących RNA przy użyciu modeli zwierzęcych ad 5

Powszechnie stosowane metody ukierunkowane na RNA obejmują RNAi i stosowanie morfolin. Te dwa podejścia różnią się mechanicznie. RNAi promuje degradację lncRNA, podczas gdy morfoliny sterycznie przeszkadzają w procesach komórkowych, takich jak splicing, i zapobiegają tworzeniu się lub funkcjonowaniu dojrzałego lncRNA. Steryczna interferencja może również zakłócać wiązanie lncRNA z innymi makrocząsteczkami, zapobiegając tworzeniu się funkcjonalnych kompleksów (49). Danio pręgowany jest atrakcyjnym modelem zwierzęcym do badania lncRNA, ponieważ morfoliny można łatwo poddać mikroiniekcji w stadium embrionalnym, jednokomórkowym w celu osłabienia funkcji lncRNA w trakcie rozwoju i w wieku dorosłym (72). Read more „Badanie długich niekodujących RNA przy użyciu modeli zwierzęcych ad 5”

Badanie długich niekodujących RNA przy użyciu modeli zwierzęcych czesc 4

Ta cecha sprawia, że modele zwierzęce dobrze nadają się do badania lncRNA, ponieważ ekspresja lncRNA jest bardziej specyficzna względem tkanki i komórki niż ekspresja genu kodującego białko (5, 10, 64). W porównaniu z komórkami hodowanymi materiał pochodzący od zwierząt jest generalnie mniej obfity i bardziej czasochłonny do wygenerowania. Niemniej jednak, modele zwierzęce zapewniają bezpośredni, in vivo dowód endogennej ekspresji lncRNA i dramatycznie zawężają odpowiednią przestrzeń poszukiwań podczas badania fenotypów. Nowoczesne techniki dostępne dla badań genomicznych, takie jak RNA-seq, zapewniają bezstronne, wysokoprzepustowe podejście do badania endogennej ekspresji lncRNA oraz odkrywania i składania nowych lncRNA de novo (64). Ekspresja lncRNA w obrębie rażąco rozciętej tkanki może ujawnić swoistość tkanki, chociaż lncRNA wyrażane tylko w niewielkiej części komórek mogą być niewykrywalne. Read more „Badanie długich niekodujących RNA przy użyciu modeli zwierzęcych czesc 4”

Badanie długich niekodujących RNA przy użyciu modeli zwierzęcych cd

Ponadto, heteroprzeszczepy wykazujące nadekspresję HOTAIR w linii komórkowej pochodzącej z przerzutowej tkanki sutka mają zwiększoną skłonność do przerzutów u myszy (34). Ponadto około 1900 lncRNA ulega ekspresji różnicowej w ostrej białaczce limfoblastycznej z komórkami T (35). To odkrycie jest dalej potwierdzone w tym samym badaniu przez wykazanie u myszy, że jeden z tych lncRNA, LUNAR1, jest niezbędny do wzrostu heteroprzeszczepu w ludzkiej linii komórek chłoniaka z limfocytów T (35). Wreszcie, badania ksenoprzeszczepów mogą również wspierać znaczenie in vivo lncRNA zaangażowanych w procesy biologiczne, takie jak niedotlenienie, o których wiadomo, że sprzyjają progresji nowotworu (36). Na przykład lncRNA NPTN-IT1 (znany również jako lncRNA-LET) (37), TP53COR1 (38) i LINC-ROR (39) wszystkie regulują indukowaną hipoksją sygnalizację i wpływają na wzrost ksenoprzeszczepu. Read more „Badanie długich niekodujących RNA przy użyciu modeli zwierzęcych cd”

Badanie długich niekodujących RNA przy użyciu modeli zwierzęcych ad

Podobne podejścia do hybrydyzacji, takie jak sekwencjonowanie radioimmunologiczne (RIA-seq), można również stosować do badania interakcji lncRNA-RNA (20). Inne techniki, takie jak immunoprecypitacja RNA (RIP) lub jego warianty, sieciujące immunoprecypitację (CLIP) (21, 22) i ulegające fotostabilnemu wzmocnione sieciowanie immunoprecypitacją (PAR-CLIP) (23), wykorzystują przeciwciała do oczyszczania lncRNA kompleksy białkowe. Dodatkowo, podejścia o wysokiej przepustowości do badania struktury drugorzędowej RNA, takie jak selektywne 2: hydroksylowe acylowanie i doświadczenie profilowania in vivo (icSHAPE) (24) lub selektywne acylowanie 2 -hydroksylu analizowane przez sekwencjonowanie wydłużania startera (SHAPE-seq) (25) ) również zostały opracowane. Łącznie, te techniki pokazują, że lncRNA oddziałują z różnymi makromolekułami, potencjalnie wpływając na szeroki zakres funkcji biologicznych. Figura 2Techniki do badania właściwości lncRNA i ekspresji tkankowej. Read more „Badanie długich niekodujących RNA przy użyciu modeli zwierzęcych ad”

Badanie długich niekodujących RNA przy użyciu modeli zwierzęcych

Liczba długo niekodujących RNA (lncRNA) gwałtownie wzrosła; jednak nasze zrozumienie ich funkcji pozostaje ograniczone. Chociaż hodowane komórki ułatwiły badanie funkcji lncRNA na poziomie molekularnym, zastosowanie modeli zwierzęcych zapewnia bogaty kontekst do badania fenotypowego wpływu tych cząsteczek. Obiecujące wstępne badania z wykorzystaniem modeli zwierzęcych wykazały, że lncRNA wpływają na różnorodną liczbę fenotypów, od subtelnych dysmorfofobii do żywotności. Tutaj podkreślamy różnorodność modeli zwierzęcych i ich wyjątkowe zalety, omawiamy zastosowanie modeli zwierzęcych do profilowania ekspresji lncRNA, oceniamy strategie eksperymentalne do manipulowania funkcją lncRNA in vivo i przeglądamy fenotypy przypisywane lncRNA. Pomimo ograniczonej liczby badań wykorzystujących modele zwierzęce, lncRNA są już rozpoznawane jako godna uwagi klasa cząsteczek o ważnych implikacjach dla zdrowia i choroby. Read more „Badanie długich niekodujących RNA przy użyciu modeli zwierzęcych”

Tłumaczenie represji HIF2 ekspresja u myszy z Chuvash polycythemia odwraca czerwienicę ad

IRP1 występuje w dynamicznej równowadze między dwiema postaciami: postacią cytosolową aconitazy z klastrem 4Fe-4S w jej miejscu aktywnym i postacią apoproteiny, która wykazuje aktywność wiązania IRE. Gdy poziom żelaza w komórce jest niski, IRP1 istnieje głównie w postaci wiążącej IRE, która nie ma nienaruszonego skupiska Fe-S. Gdy poziom żelaza w komórce jest wysoki, IRP1 odzyskuje swój klaster żelaza i siarki i występuje głównie w postaci acetonitazy cytozolowej. Postać aksonitazy cytozolowej jest również stabilizowana przy niskich stężeniach tlenu (16, 17). Niedawno, my i inni odkryliśmy, że myszy pozbawione Irp1 rozwijają erytrocytozę / czerwienicę (18. Read more „Tłumaczenie represji HIF2 ekspresja u myszy z Chuvash polycythemia odwraca czerwienicę ad”