Niehamujący mutant domeny rusztowania jaskini-1 wzmacnia syntezę NO pochodzącą z eNOS i rozszerzenie naczyń u myszy ad 6

Cavnoxin zmniejsza napięcie naczyniowe w naczyniach WT. Pierścienie aortalne od myszy C57BL / 6 inkubowano z nocną krwinokselem w hodowli narządowej i odpowiedzi izometryczne na KCl i PE badano w mo- netach; n = 20 pierścieni od 5 myszy. Aorty były izolowane od myszy Cav-1 (B) lub eNOS-KO (C), traktowanych wcześniej Cavoxinem lub AP jak wyżej. Zarówno indukowane przez KCl jak i PE zmiany napięcia oceniano jak powyżej. Dane są średnie. SEM, z 4 pierścieniami na mysz i 4. 5 myszy na grupę. Figura 6 Proponowany mechanizm zwiększonego uwalniania NO eNOS przez Cavnoxin i F92AA Cav-1. eNOS (owalny) jest uważany za istniejący w dynamicznej równowadze między. bardziej aktywnym. stan (wolny od zacisku hamującego Cav-1, lewa strona) i. mniej aktywny. stan (związany i hamowany przez endogenny Cav-1, dolny panel). Nasze dane pokazują, że F92AA-Cav-1 i Cavnoxin mogą wiązać eNOS (po lewej) i zapobiegać jego hamowaniu przez endogenny Cav-1, co skutkuje utworzeniem trzeciego stanu dynamicznego charakteryzującego się eNOS związanym z niehamującą domeną rusztowania Cav-1 zawierającą podstawienie F92A (dolny panel, skrajnie prawy), przesuwając równowagę eNOS w kierunku. bardziej aktywnej. stan, zapobiegając hamującemu zaciskowi endogennego Cav-1. Omówienie Nasze wyniki pokazują, że celowana mutacja domeny rusztowania Cav-1 zmniejsza hamujący wpływ endogennego Cav-1 na eNOS i zwiększa NO pochodzący z eNOS. Mutacja F92 w Cav-1 nie wpływa na jej biochemiczne lub biofizyczne właściwości, takie jak flotacja na gradienty sacharozy, prędkość sedymentacji i oligomeryzacja, lokalizacja komórkowa lub interakcja z eNOS in vitro. Jednakże F92AA-Cav-1 zwiększa uwalnianie NO z komórek eksprymujących eNOS. Mechanistyczne eksperymenty z użyciem oczyszczonych eNOS, GSTA Cav-1 i GSTa F92AA Cav-1 potwierdzają, że dzieje się to poprzez wiązanie F92AA-Cav-1 z eNOS, a tym samym usuwanie hamującego wpływu endogennego Cav-1 na eNOS. Co więcej, przepuszczalny dla komórek peptyd niosący zmutowaną domenę rusztowania zwaną Cavnoxin zwiększa uwalnianie NO, zmniejsza wiązanie eNOS z endogennym Cav-1 z hodowanych EC, zmniejsza napięcie naczyniowe i obniża BP w sposób zależny od eNOS, ponieważ działania obniżające ciśnienie z Cavnoxin są eliminowane u myszy eNOS KO. Korzystne działanie Cavnoxin na izolowanych naczyniach wymaga zarówno endogennego Cav-1 jak i eNOS, ponieważ działania naczyniowe peptydu są eliminowane w obu szczepach KO. Zatem dane te dokumentują wykonalność polepszenia funkcji naczyniowych przez zakłócanie hamującego wpływu endogennego Cav-1 na eNOS i sugerują, że ta interakcja jest potencjalnym celem farmakologicznym. Zgromadzenie dowodów biochemicznych i genetycznych wykazało, że eNOS jest silnie regulowany przez Cav-1 poprzez bezpośrednie oddziaływanie białko-białko. Jednak niewiele wiadomo na temat stopnia, w jakim eNOS jest hamowany przez Cav-1 w warunkach fizjologicznych, niestymulowanych, ponieważ utrata Cav-1 znosi interakcję z eNOS, jak również tworzenie kaweoli w EC (tj. Cav-1 kontrola funkcji eNOS nie może być oderwana od jej roli w montażu kaweola). Tutaj pokazujemy, że F92A-Cav-1 może wchodzić w interakcje z eNOS i promować uwalnianie NO. Ponieważ przeprowadzone testy biochemiczne wskazują, że F92A p Cav-1 zachowuje się identycznie jak WT Cav-1, nasze dane są pierwszymi, wedle naszej wiedzy, specyficznie wykazującymi wzrost uwalniania NO pochodzącego z eNOS w wyniku zmniejszenia hamowania hamującego Cav-1. zacisk bez ingerencji w inne funkcje endogennego Cav-1 (w celu utworzenia kaweoli). Ponadto ten mutant może być przydatny do oddzielenia funkcji Cav-1 w regulacji innych szlaków sygnałowych, które opierają się na funkcji domeny rusztowania Cav-1 od jego strukturalnej roli w montażu organelli. Jednak eksperymenty in vivo z Cavnoxinem u zwierząt lub naczyń bez eNOS lub Cav-1 są zgodne z eNOS jako kluczowym celem regulującym czynność naczyniową i BP i ujawniają, że Cavnoxin ma wysoki stopień swoistości względem interakcji eNOS / Cav-1. Podsumowując, pokazujemy tutaj, że ukierunkowana interferencja z działaniami hamującymi endogennego Cav-1 promuje uwalnianie NO, wzmacnia funkcję naczynia i obniża BP. Ponieważ NO pochodzący z eNOS ma krytyczne znaczenie dla prawidłowej homeostazy sercowo-naczyniowej, nasze wyniki sugerują, że możliwe jest modulowanie funkcji eNOS poprzez zakłócenie jego oddziaływania białko-białko z Cav-1. Chociaż uważa się, że aktywacja eNOS jest ogólnie korzystna dla układu sercowo-naczyniowego, w pewnych okolicznościach, w szczególności u myszy pozbawionych Cav-1, nieprzerwany odłączony eNOS może promować nadciśnienie płucne i przerost serca (11). Opowiadamy się za ideą, że Cavnoxin jest wyjątkowy pod względem działania w regulowaniu korzystnych aspektów aktywacji eNOS, ponieważ kawoliny są nadal obecne i funkcjonują u normalnych myszy, w przeciwieństwie do myszy Cav-1 KO, w których występuje wiele rozregulowanych ścieżek, w tym metabolizm lipidów, homeostaza wapnia i mechanotransdukcja
[hasła pokrewne: justfit, kalkulator kalorii na mase, solarium tychy ]
[więcej w: infekcja dróg moczowych objawy, ośrodki terapii uzależnień, właściwości olejku rycynowego ]