Badanie długich niekodujących RNA przy użyciu modeli zwierzęcych ad 6

Strategie manipulowania genetycznym locus kodującym lncRNA, z których wiele niedawno poddano przeglądowi (83), stanowią alternatywę dla podejść ukierunkowanych na RNA. Można wyeliminować transkrypcję lncRNA o działaniu cis i trans, w przeciwieństwie do zależnych od dawki, potranskrypcyjnych efektów podejść ukierunkowanych na RNA. Ponadto, jeśli ta ablacja występuje w linii płciowej, możliwe jest wytworzenie transgenicznych zwierząt, których potomstwo jest konstytutywnie pozbawione danego lncRNA. Te aspekty podejścia ukierunkowanego na DNA mają kilka zalet w porównaniu z podejściami ukierunkowanymi na RNA. Metody ukierunkowane na DNA mogą ułatwić profilowanie ekspresji lncRNA, jeśli jego miejsce jest zastąpione genem reporterowym. Strategię tę zastosowano u myszy dla 18 różnych loci genu lncRNA (84). Na przykład okazało się, że ryzyko lncRNA ulega ekspresji w dyskretnych obszarach mózgu i rdzenia kręgowego myszy, podczas gdy ekspresja Mdgt u myszy jest ograniczona do jąder, mózgu, grasicy i okrężnicy (84). Ta metodologia może również wykrywać lncRNA, które występują tylko w mniejszości komórek. Na przykład to samo badanie wykazało, że mysz Pantr2 (znana również jako linc-Brn1b) ulega ekspresji w wybranych obszarach mózgu w trakcie rozwoju korowego i jest selektywnie eksprymowana w górnych warstwach kory w wieku dorosłym (84). Ta strategia reportera zapewnia zatem wystarczającą rozdzielczość, aby ocenić ekspresję lncRNA, nie tylko między tkankami, ale także w tkance. Zgłoszono spektrum fenotypów po usunięciu lncRNA za pomocą metod ukierunkowanych na DNA. Na przykład myszy pozbawione ryzyka lub śmierci umierają okołoporodowo z różnym stopniem penetracji, demonstrując istotną, wspierającą życie rolę dla obu genów (84). U myszy z niedoborem ryzyka i z niedoborem Mdgt obserwuje się rozwój karłowatości, o mniejszych rozmiarach ciała i zmniejszonej masie ciała w porównaniu ze zwierzętami z WT (84). Podobny fenotyp rozwojowy zaobserwowano u myszy pozbawionych lncRNA Pint (84). Ablacja lncRNA może również prowadzić do bardziej subtelnych fenotypów. Na przykład delecja Sra1 u myszy poprawia działania związane z otyłością, gdy zwierzęta karmione są dietą wysokotłuszczową (85), a usunięcie Hotair u myszy powoduje nieprawidłowości w budowie kręgów i nadgarstka (86). Zatem podejścia ukierunkowane na DNA wykazały, że lncRNA mogą wpływać nie tylko na fenotypy dramatyczne, ale także bardziej zniuansowane. Podejścia ukierunkowane na DNA i imprinting genomowy. Modele zwierzęce funkcji lncRNA wykorzystujące podejścia ukierunkowane na DNA odegrały zasadniczą rolę w badaniu fenotypowych efektów imprintingu genomowego, w wyniku czego ekspresja genu pochodzi od allelu swoistego dla rodzica, podczas gdy transkrypcja z innego allelu jest repigenetycznie epigenetycznie. Na przeżywalność i masę ciała wpływa odciśnięta ekspresja lncRNA. Na przykład usunięcie matczynej Meg-3 (znanej również jako Gtl2) u myszy powoduje śmierć okołoporodową, czego nie obserwuje się po usunięciu ojcostwa (87). Podobnie, ablacja matki H19 u myszy powoduje większą masę ciała potomstwa w porównaniu z potomstwem z delecją ojców (88, 89). Dodatkowo, samice myszy pozbawione jednego allelu Tsix, lncRNA odpowiedzialnego za inaktywację chromosomu X, wytwarzają mniej potomstwa, które przeżyły, niż mężczyźni pozbawieni tego samego genu (90, 91). Na koniec, delecja X-połączonych Tsx u samców myszy skutkuje mniejszymi jądrami, mniejszymi zachowaniami związanymi z strachem i wzmocnioną pamięcią krótkotrwałą (92). Łącznie, badania te wykazują różnorodne funkcje in vivo dla nadrukowywanych lncRNA. Modele zwierzęce funkcji lncRNA również odgrywały zasadniczą rolę w badaniu uzupełniających mechanizmów molekularnych leżących u podłoża imprintingu genomowego (93). Na przykład, usunięcie ojcowskiego Kcnq1ot1 (znanego również jako KvDMR1) u myszy powoduje potomstwo o zmniejszonej masie ciała i zmniejszeniu ekspresji proksymalnych genów, co nie daje efektu po matce (94). Wyniki te zostały dalej udoskonalone po bardziej ukierunkowanej strategii ablacji u myszy, w której przed promotorem Kcnq1ot1 wprowadzono przedwczesną sekwencję terminacji (95). Ta zmiana spowodowała również de-represję genu, pokazując, że transkrypcja Kcnq1ot1 jest konieczna do wyciszania genu (95). Wreszcie, uzupełniające badania molekularne wykazały, że mysie Kcnq1ot1 oddziałuje z chromatyną i modyfikatorami epigenetycznymi o specyficzności tkankowej (96). To uzupełniające zastosowanie modeli zwierzęcych do badania funkcji lncRNA uwidacznia użyteczność modeli zwierzęcych podczas badania funkcji lncRNA in vivo. Ograniczenia podejść ukierunkowanych na DNA. Podejścia ukierunkowane na DNA mają również istotne ograniczenia. Często zdarza się, że duży region obejmujący większość, jeśli nie całość, genu lncRNA jest usuwany, chociaż możliwe są mniejsze specyficzne dla domeny (97) i specyficzne dla promotora (90, 94, 95) delecje.
[patrz też: ośrodki terapii uzależnień, ile kalorii ma mozzarella, body space tychy ]
[podobne: ile kalorii ma mozzarella, infekcja dróg moczowych objawy, ośrodki terapii uzależnień ]